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新品上架!抗氧化能力评价的三大测定方法

发布日期:2020-04-28 14:02 浏览次数:

一、测定意义
机体中存在多种抗氧化物,包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等,可以清除体内产生的各种活性氧自由基,以阻止活性氧自由基诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。在生物学、医学和药学研究中,通常需要检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
二、抗氧化能力的常用检测方法
体外测定抗氧化活性是基于特定条件下,样品对检测体系中自由基清除能力、抗油脂过氧化能力、氧化还原能力等来衡量和表征。在实际应用中,通常需要根据样品的物理、化学特征,灵活采用多种方法综合评价其抗氧化活性,以使实验结果更加客观和真实。铁离子还原能力测定(FRAP法)1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)法2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐(ABTS)法由于其测定准确性和操作简便性,是目前最广泛使用的抗氧化能力检测方法。

1.以氧化还原潜力评价的抗氧化能力
FRAP法:
在酸性条件下,抗氧化物还原Fe3+-三吡啶三嗪 (Fe3+-TPTZ),产生蓝色的Fe2+-TPTZ,在593nm检测吸光度的变化,并以标准抗氧化剂Trolox作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。
优点:由于反应在酸性条件下进行,可以抑制内源性的干扰因素,测定准确性最高
缺点:由于含有巯基(-SH)的有机物质不能与三价铁离子反应,无法测定硫醇化合物的还原能力。
适用样本:该方法适用样本范围最广,可用于生物体液、食品、植物提取液、果汁等物质的总抗氧化能力检测。

2.以清除自由基能力评价的抗氧化能力
ABTS法:
ABTS与氧化剂反应生成评价体系的基础-稳定的蓝绿色阳离子自由基 ABTS+,能溶于水相或酸性乙醇介质中,在734nm处有最大吸收。被测物质加入ABTS+溶液后,所含抗氧化成分能与ABTS+发生反应而使反应体系褪色,ABTS+被还原程度和反应时间取决于生物活性物质的抗氧化能力和浓度。在734nm检测吸光度的变化,并以Trolox作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。
优点:ABTS法快速、简便、特异性价高、与抗氧化剂的生物活性相关性最强、pH适用范围宽、更适用于水溶性物质。
缺点:间接检测方法,需要制备自由基的发生体系。
适用样本:广泛用于亲水性和亲脂性物质、纯物质以及蔬菜、水果、饮料的总抗氧化能力的评价。
DPPH法:
该方法是一种以粉红色、稳定的DPPH为基础而构建的评价体系。DPPH为稳定的自由基,溶于甲醇,乙醇等极性溶剂中,当抗氧化物质被加入反应体系时,DPPH被还原,颜色由粉红色逐渐转变为黄色。DPPH在515nm处有最大吸收,因此可用吸光度的变化并以Trolox作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。
优点:简单快速,与ABTS法相比,不需要制备自由基发生体系,更适用于醇溶性物质
缺点:自由基选择性强,不和只有一个羟基的芳香酸、无羟基的类黄酮反应,这类物质需用其他方法测定。如果反应体系中存在 515nm下有吸收的物质(如胡萝卜素),结果就会被干扰,另外,由于血浆中的蛋白质在醇溶液中发生沉淀,该方法也不适用于检测血浆的抗氧化能力。
适用样本:广泛应用于食品、植物提取液、果汁等物质的总抗氧化能力检测。
科铭牌总抗氧化能力试剂盒:


标准曲线:



 
检测举例:使用新鲜百合测得的总抗氧化能力ABTS法>FRAP法>DPPH法。

总抗氧化能力测定
检测方法 样本编号 A测定 A空白 ΔA 质量(g) (μmol Trolox/g 鲜重)
DPPH法 1 0.9348 1.0018 0.0670 0.1003 1.0587
2 0.9177 1.0018 0.0841 0.1011 1.2895
3 0.9003 1.0018 0.1015 0.1014 1.5283
FRAP法 1 0.2434 0.0594 0.1840 0.1003 1.3695
2 0.2624 0.0594 0.2030 0.1011 1.5104
3 0.2756 0.0594 0.2162 0.1014 1.6108
ABTS法 1 0.8509 1.3389 0.4880 0.1001 6.9592
2 0.7896 1.3389 0.5493 0.1005 7.8001
3 0.7177 1.3389 0.6212 0.1016 8.7234