新品上架！抗氧化能力评价的三大测定方法

发布日期：2020-04-28 14:02 浏览次数： 作者：admin

一、测定意义
机体中存在多种抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除体内产生的各种活性氧自由基，以阻止活性氧自由基诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。在生物学、医学和药学研究中，通常需要检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
二、抗氧化能力的常用检测方法
体外测定抗氧化活性是基于特定条件下，样品对检测体系中自由基清除能力、抗油脂过氧化能力、氧化还原能力等来衡量和表征。在实际应用中，通常需要根据样品的物理、化学特征，灵活采用多种方法综合评价其抗氧化活性，以使实验结果更加客观和真实。铁离子还原能力测定（FRAP法）、1，1-二苯基苦基苯肼（DPPH）法、2，2-联氮基-双-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨盐（ABTS）法由于其测定准确性和操作简便性，是目前最广泛使用的抗氧化能力检测方法。
1.以氧化还原潜力评价的抗氧化能力
FRAP法：
在酸性条件下，抗氧化物还原Fe³⁺-三吡啶三嗪 (Fe³⁺-TPTZ)，产生蓝色的Fe²⁺-TPTZ，在593nm检测吸光度的变化，并以标准抗氧化剂Trolox作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。
优点：由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的干扰因素，测定准确性最高。
缺点：由于含有巯基（-SH）的有机物质不能与三价铁离子反应，无法测定硫醇化合物的还原能力。
适用样本：该方法适用样本范围最广，可用于生物体液、食品、植物提取液、果汁等物质的总抗氧化能力检测。
2.以清除自由基能力评价的抗氧化能力
ABTS法：
ABTS与氧化剂反应生成评价体系的基础-稳定的蓝绿色阳离子自由基 ABTS⁺，能溶于水相或酸性乙醇介质中，在734nm处有最大吸收。被测物质加入ABTS⁺溶液后，所含抗氧化成分能与ABTS⁺发生反应而使反应体系褪色，ABTS⁺被还原程度和反应时间取决于生物活性物质的抗氧化能力和浓度。在734nm检测吸光度的变化，并以Trolox作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。
优点：ABTS法快速、简便、特异性价高、与抗氧化剂的生物活性相关性最强、pH适用范围宽、更适用于水溶性物质。
缺点：间接检测方法，需要制备自由基的发生体系。
适用样本：广泛用于亲水性和亲脂性物质、纯物质以及蔬菜、水果、饮料的总抗氧化能力的评价。
DPPH法：
该方法是一种以粉红色、稳定的DPPH为基础而构建的评价体系。DPPH为稳定的自由基，溶于甲醇，乙醇等极性溶剂中，当抗氧化物质被加入反应体系时，DPPH被还原，颜色由粉红色逐渐转变为黄色。DPPH在515nm处有最大吸收，因此可用吸光度的变化并以Trolox作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。
优点：简单快速，与ABTS法相比，不需要制备自由基发生体系，更适用于醇溶性物质。
缺点：自由基选择性强，不和只有一个羟基的芳香酸、无羟基的类黄酮反应，这类物质需用其他方法测定。如果反应体系中存在 515nm下有吸收的物质(如胡萝卜素)，结果就会被干扰，另外，由于血浆中的蛋白质在醇溶液中发生沉淀，该方法也不适用于检测血浆的抗氧化能力。
适用样本：广泛应用于食品、植物提取液、果汁等物质的总抗氧化能力检测。
科铭牌总抗氧化能力试剂盒：

标准曲线：



 
检测举例：使用新鲜百合测得的总抗氧化能力ABTS法＞FRAP法＞DPPH法。

总抗氧化能力测定
检测方法	样本编号	A测定	A空白	ΔA	质量（g）	（μmol Trolox/g 鲜重）
DPPH法	1	0.9348	1.0018	0.0670	0.1003	1.0587
	2	0.9177	1.0018	0.0841	0.1011	1.2895
	3	0.9003	1.0018	0.1015	0.1014	1.5283
FRAP法	1	0.2434	0.0594	0.1840	0.1003	1.3695
	2	0.2624	0.0594	0.2030	0.1011	1.5104
	3	0.2756	0.0594	0.2162	0.1014	1.6108
ABTS法	1	0.8509	1.3389	0.4880	0.1001	6.9592
	2	0.7896	1.3389	0.5493	0.1005	7.8001
	3	0.7177	1.3389	0.6212	0.1016	8.7234