发布日期:2025-02-13 17:18 浏览次数: 342 作者:admin
1 开发目的
现有的GPX试剂盒是酶法试剂盒,是GPX测定的经典方法。具有特异性强,操作简便,稳定性高的特点。
由于酶法试剂盒含酶试剂,成本比较高,相应地试剂盒价格就有点小贵。我司现有两种酶法试剂盒:(1)酶标仪使用,货号GPX-1-W,规格为100管/96样,售价1500/盒;(2)分光光度计,货号GPX-2-W,规格50管/48样,售价850元/盒。
考虑到有些用户预算比较紧张,我们研发了低成本的DTNB法GPX检测试剂盒。
2 研发过程
为了降低成本,我们放弃了酶试剂,转而使用DTNB直接检测GSH的减少量。但是DTNB法存在一些问题:
(1)测定过程中反应底物GSH的浓度会持续降低,过低的GSH浓度可能会影响反应的速率,而过高的浓度则会导致最终显色过深无法测定;
(2)样本中能与DTNB产生显色反应的成分比较复杂;
(3)反应时间过长会由于反应进入平台期影响结果,反应时间过短则无法检测到明显变化。
为了解决这些问题,我们使用常见的植物样本如水稻叶片、拟南芥叶片等对反应体系与底物进行了一系列摸索与实验验证后,成功研发了DTNB法GPX活性检测试剂盒。
3 方法对比
酶法 | DTNB法 | |
优势 |
(1)反应体系中的GSH浓度始终维持在较高水平,不会影响反应速率,稳定性强; (2)反应的特异性很强,检测结果更加准确; (3)检测操作一步完成,更加简便快速。 |
(1)价格更加便宜; (2)不需要紫外分光光度计和石英比色皿,仪器要求更低。 |
劣势 |
(1)成本高,价格贵; (2)个别情况下紫外波长存在干扰。 |
(1)酶活性过高或者过低都可能影响测定结果,适用范围更小; (2)操作步骤更复杂,耗时更长; (3)特异性和灵敏度相对较差。 |