生化测定操作不到位

发布日期：2024-03-21 11:07 浏览次数： 作者：admin

1 一个实例
       曾经有个硕士研究生向我报告：蚕卵酶活性变化无规律。与其讨论后，我未发现原因何在。无奈之下，我决定旁观该生的测定全过程。发现：在匀浆后，该生只是用洗瓶简单冲洗匀浆器的刀头，刀头缝隙中仍然残留了上一份样本的碎片，污染了下一份样本。在每次匀浆后都彻底清理刀头后，蚕卵的酶活性变化就出现了规律。
       测定操作规范是指按照实验指导书或者说明书进行了操作。测定操作到位是指该步操作实现了目的。
       在上述实例中，刀头清洗不到位导致蚕卵酶活性变化无规律。该生测定操作规范，在匀浆后对刀头进行了冲洗；但是该生测定操作不到位，简单的冲洗并没有实现彻底清除残留物的目的。
2 测定操作不到位
       生化测定操作依次为：（1）配制溶液，（2）测定取样，（3）称量样本，（4）提取，（5）分离，（6）加液，（7）反应，（8）测量。
2.1 配制溶液不到位
       （1）称量不精确，（2）未按照顺序逐个加入不同试剂并溶解后再加入下一种试剂，（3）交叉污染，（4）临用前配制的试剂配制过早或者未及时用完。
2.2 测定取样不到位
       所取部分不能代表该重复样本的整体状况。有些样本存在空间异质性，导致测定指标的含量或者活性在样本的不同部位存在差异。
2.3 样本称量不到位
       （1）不精确，固态样本的克数、液态样本的毫升数或者单细胞样本的百万细胞数；（2）不迅速，冻样升温或者吸附水分，干样返潮。
2.4 提取不到位
       （1）不充分，细胞、组织或者器官未充分破碎；（2）不一致，不同样本破碎程度不一致，尤其是手动匀浆时；（3）降解或者失活，尤其是升温导致拟测定物质降解或者酶失活。
2.5 分离不到位
       （1）不彻底，干扰物质残留多；（2）降解或者失活，升温或者分离液导致拟测定物质降解或者酶失活。
2.6 加液不到位
       （1）体积不精确，导致测定值重复性差；（2）顺序错乱，未严格按照实验指导书或者说明书的顺序依次加入各种溶液；（3）漏加液或者重复加液，漏加液导致反应不能进行，重复加液导致测定值重复性差；（4）交叉污染，加不同溶液时未更换枪头。
2.7 反应不到位
       （1）未混匀，未震荡混匀反应体系；（2）未严格控制反应条件，尤其是确保反应时实际温度是指定的温度。
2.8 测量不到位
       （1）终止型反应未在显色复合物稳定期进行测量，（2）连续型反应未在线性期测量，（3）连续型反应未控制加完溶液到初始测量的时间尽可能一致，导致不同样本测量初始值相差很大。
3 解决办法
3.1 反复训练，积累测定操作经验
       为了保证研究生测定操作到位，课题主持人花费大量的时间和经费，来反复训练研究生，尤其是硕士研究生的测定操作。由于学制原因，具备丰富测定经验的研究生按期毕业。课题主持人不得不从头重新训练新的研究生。
       如此循环往复，课题组持续投入大量的时间和精力，来训练研究生的测定操作，但是课题组的测定效率却始终低下，难以在同行竞争中脱颖而出，不断申请到新课题，实现课题-论文的良性循环。
3.2 选择代测服务，借助于专业公司的测定能力
       代测服务：课题组购买专业公司的代测服务，公司负责预测定和正式测定，课题组只需准备合格的样本和审核测定数据。
       我司为代测用户提供：（1）咨询，如何选择合理的测定指标，如何准备合格的样本，如何选择合适的测定方法；（2）系列成套高质量的代测服务，目前可测定968种生化指标；（3）免费预测定，用户对预测定结果满意后再签订正式代测合同；（4）可疑测定结果的验证、原因查找和针对性改进，保证生化测定数据可靠、真实和可用，从而发表SCI论文，防止发表后被迫撤回。
       选择我司生化代测服务，可以全面排除生化测定风险，从而用户能够轻松、及时拿到可靠、真实和可用的生化测定数据，据此得出明确、可靠的研究结论，发表更多SCI论文，课题主持人得以优质结题，研究生得以顺利毕业。
备注
       生化测定的5类风险：（1）测定指标漏选、少选或者分散；（2）样本质不可靠、数不合理或者量不充足；（3）测定方法专一性弱、重复性差或者灵敏度低；（4）测定用品仪器设备性能落后、试剂纯度低或者耗材质量差；（5）测定操作不规范、不到位。其中，最常见的风险是测定操作不到位。
       试剂盒方式不适合生化测定操作不到位的用户：（1）硕士研究生，（2）非生化、生理专业的博士研究生或者老师。仅仅做过生化课程实验并不能保证生化测定操作到位。
       如果您的生化测定操作不到位，那么请务必选择我司生化代测服务，从而避免测定反复，甚至失败，导致试剂、样本和时间的浪费。