不失败，少浪费，更轻松
发布日期：2022-04-06 11:20
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作者：admin
生化测定是烦难的，只有同时具备（1）质可靠、数合理和量充足的生物样本，（2）合理的测定指标，（3）适合的测定方法，（4）质量合格和种类齐全的测定用品，（5）规范和到位的测定操作，和（6）充足的测定时间，才能轻松、及时得到可靠、真实的测定结果，得出明确、可靠的研究结论，发表高水平的研究论文。
课题组进行生化测定的目的依次是（1）确认某种生物学现象产生的分子机制，（2）发表高水平研究论文，（3）优质结题，（4）成功申请到新课题。
因此，课题组生化测定工作应该依次追求（1）不失败，（2）少浪费，（3）更轻松。
生化测定失败包括（1）生化测定工作未顺利完成，没有得到生化测定结果，（2）生化测定结果不可靠、不真实，据此撰写和发表的研究论文存在造假风险，（3）已有生化测定结果不能得出明确结论，不能撰写研究论文。
生化测定失败本身就是最大的浪费！此外，生化测定浪费还包括（1）多测了不相关指标，（2）多测了不必要的生物样本。
除了不失败和少浪费外，更轻松也应该是生化测定工作的追求。毕竟课题组自身的时间和精力都是有限的。如果课题组能够从烦难的生化测定工作中彻底解脱出来，就有更多的时间和精力用于研究方案设计、生物样本准备、数据分析和研究论文写作，从而显著提升研究效率，取得更多、更高水平的研究成果，在激烈的同行竞争中脱颖而出。
生化测定的传统方式是课题组自己完成全部测定工作。生化测定外包方式是课题组把烦难的生化测定工作全部或者部分委托给专业公司完成的新型测定方式。相比传统方式，课题组选择外包方式，可以更轻松地完成烦难的生化测定工作。
附录
一、不失败
评价生化测定是否成功的标准是能否（1）得出明确、可靠的研究结论，（2）发表高水平的研究论文！
要想不失败，课题组就必须（1）准备量充足和质可靠的生物样本，（2）做好预测定，（3）选择合理的测定指标。
1. 生物样本的量不充足
生物样本的量是指某种处理的某个取样时间所取的生物样本的量，如组织样本的重量，液体样本的体积，细胞样本的细胞数等。生物样本的量取决于单次测定的需要量，测定重复次数，测定指标数等，还需要加上预测定、验证和可能加测指标的量。
生物样本的量不充足，就无法完成全部生化测定工作，造成测定失败。
解决办法：能取尽取，宁可备而不用，不可用而不备。通常至少应该是测定顺利时需要量的1.5倍！
2. 生物样本的质不可靠
生物样本的质包括（1）遗传背景是否清晰、准确，尤其是细胞系、转基因和基因敲除等，（2）取样是否具备典型性、代表性和重复性，（3）在保存、寄送和提取过程中生物样本是否变质，尤其是酶活性和易氧化物质，如维生素C和E，辅酶一和二等。
生物样本的质不可靠，生化测定结果就不可靠，即不能反映测定指标的变化与特定生物学现象之间的关系。
解决办法：做好预实验，观察不同处理组合中预期特定生物学现象，判断（1）遗传背景是否明确无误，（2）哪种处理组合能够稳定出现特定生物学现象，从而为正式实验设置处理组合提供依据，并保证取样的典型性、代表性和重复性。此外，在保存时注意生物样本的速冻、小包装、摆放方式和超低温冰箱的日常管理，在寄送时注意干冰用量充足和外包装隔温效果，在称量、匀浆提取和离心分离时注意确保始终处于实际低温中等。
3. 预测定未做好
如果说做好预实验能够保证生物样本的质可靠，从而保证生化测定结果的可靠性，那么做好预测定就能够保证正式测定顺利进行和正式测定结果真实，即生化测定结果反映了所测定生物样本的真实变化。
通过预测定，可以发现测定能否顺利进行和测定结果是否正常。
预测定不能顺利进行，或者预测定结果异常，其原因可能包括（1）测定用品，如仪器设备性能不正常，或者试剂和耗材质量存在问题，（2）测定操作不规范、不到位，如温度控制、匀浆均匀程度和加样顺序等，（3）生物样本问题，如变质，存在干扰物质，平行样本重复性差，本身就不含有待测定物质或者酶活性非常低等。
解决办法：只是实事求是地找出导致预测定不能顺利进行和预测定结果异常的真正原因，才能做出相应调整，保证正式测定顺利完成和正式测定结果真实。
4. 漏测了紧密相关的测定指标
只有测定了某个代谢的紧密相关指标，才能得出特定生物学现象是否确实与该代谢相关，从而得出明确的研究结论，并进一步撰写和发表研究论文。
相反，如果漏测了一个或者几个紧密相关的测定指标，那么就无法得出明确的研究结论，也就不能撰写和发表研究论文。
此外，测定指标数偏少，内容就会显得单薄，也就无法撑起一篇研究论文，更加不要说高水平的研究论文了。
解决办法：尽可能测定已知的某个代谢的全部测定指标。
二、少浪费
即使测定成功，也要尽可能少浪费。花费同样的时间、精力和经费，争取取得更多的科研成果，发表更多科研论文，从而在激烈的同行竞争中脱颖而出。
测定成本取决于单次测定成本和测定次数。单次测定成本取决于测定方法本身，通常难以显著降低。测定次数取决于测定指标数、测定样本数和生物样本的重复性。
想要少浪费，课题组就必须科学、合理地减少（1）测定指标数，（2）生物样本数。
1. 少测不相关的测定指标
测定指标数越多，测定成本就越高。
合理的测定指标是指（1）选择的测定指标紧密相关，其测定结果能够相互验证和相互配合，保证得出明确、可靠的研究结论，并且能够撰写和发表高水平的研究论文；（2）不选择相关性弱的测定指标，或者生物样本中不含有的测定指标，这些测定指标的测定结果在得出明确、可靠的研究结论，尤其是撰写和发表高水平研究论文时用不上。
少测不相关的测定指标，就可以显著降低测定成本，即少浪费。
解决办法：（1）根据参考文献，集中选择某个代谢本身的相关测定指标，不选择其它代谢的测定指标；（2）通过预测定，发现所测定生物样本中不含有的测定指标，在正式测定时删除该指标。
2. 合理减少生物样本数
生物样本数越多，测定成本就越高。
生物样本数取决于处理组合数、取样间隔和生物样本重复性。处理组合数越多，取样间隔越小，生物样本重复性越差，则生物样本数就越多。
处理组合数是指对照组和处理组的总数。取样间隔决定了组内取样次数。单细胞生物样本重复性最好，每个组的每个取样时期可以只取3个平行样本，甚至1个平行样本（统计学意义上的大样本）；室内培养的环境条件控制严格，组织或者器官的样本重复性较好，可以取3个平行样本；大田或者野生的环境条件变化比较大，生物样本重复性比较差，可以取5个，甚至更多平行样本。平行样本数越多，则测定结果的标准误越小，5个平行样本的自由度为4，3个平行样本的自由度为2，则前者标准误只有后者的1/2。
解决办法：（1）通过预实验，找出某种特定生物学现象的产生条件，即相比对照组能够稳定产生预期的生物学现象的处理组，在正式实验时只设置对照组和处理组各一，处理组合数为2，从而极显著地减少生物样本数；（2）通过预实验，确定从处理开始到产生预期生物学现象的时间，在正式实验时设置合理的取样间隔，从反映代谢变化过程的角度考虑，一般设置5个取样间隔，从而显著减少生物样本数；（3）根据生物样本的重复性，确定合理的平行样本数，从而减少生物样本数。
三、更轻松
目前课题组完成烦难的生化测定有3种方式，（1）传统方式，即课题组自己完成全部测定工作，（2）试剂盒方式，即课题组购买相应的生化测定试剂盒，在公司的技术支持下自己完成预测定和正式测定，属于部分外包，（3）代测方式，即课题组购买代测服务，由公司完成预测定和正式测定，属于全部外包。
与传统方式相比，试剂盒方式和代测方式不仅测定结果的真实性和可靠性更有保障，而且省心、省力和省时，即更轻松。
改善型课题组是指本身具备测定条件和测定能力，只是不愿意在建立合适的测定方法和配制试剂上花费更多精力和时间，从而轻松提高测定效率的课题组。
刚需型课题组是指课题组自身因为（1）测定所需的仪器设备不齐全，或者（2）测定操作不够规范和到位，或者（3）测定时间紧张等，而不能及时、顺利地完成生化测定工作的课题组。
试剂盒方式仍然需要课题组自己完成预测定和正式测定，所以试剂盒方式只适用于改善型课题组。
代测方式只需要课题组认真、及时和全面地审核公司提供的免费预测定结果，不需要自己完成预测定和正式测定，所以代测方式适合于刚需型课题组。
虽然代测方式的费用显著高于试剂盒方式，但是与试剂盒方式相比，代测方式更加省心、省力和省时，改善型课题组也可以选择代测方式。
可见，刚需型课题组选择代测方式，改善型课题组选择试剂盒方式，才可以更轻松地完成烦难的生化测定。
必须指出的是，我司10年生化测定外包实践表明：课题组必须做到（1）谨慎选择一家靠谱的生化测定外包公司，（2）在准备生物样本前就咨询该公司，（3）与该公司相互配合，尽到各自的责任，才能保证生化测定工作不失败、少浪费和更轻松[1~3]！
参考文献
[1] 课题组防骗单指南
www.cominbio.com/a/news/kemingguandian/2022/0311/2094.html
[2] 课题组咨询清单
www.cominbio.com/a/news/kemingguandian/2022/0321/2096.html
[3] 课题组生化测定外包省钱指南
www.cominbio.com/a/news/kemingguandian/2022/0329/2097.html
