常见问题
  • 怎样选择测定指标?

    笔者在撰写论文和审稿时,有时会发现,所测定的指标相互不能紧密配合,该测的指标没有测定,不该测的指标倒测了一堆,无法得出明确结论,导致论文无法发表。
    在测定指标选择时要区分课题和论文的不同需要。从课题而言,选择测定项目必须考虑全面,而且要分层次,有足够的开放性和发散性,以保证申请成功。从发表论文而言,选择测定指标一定要相互紧密联系,可以通过这些指标的变化得出一个明确结论,以发表高质量研究论文。
     
    研究者应该根据研究目的本身来选择测定指标,这需要研究者对所研究领域非常熟悉。针对不太熟悉的用户,科铭生物提供了两种解决拜访:
    (1)直接查阅某个系列,从该系列中挑选测定指标;
    (2)告知研究材料和研究目的,科铭生物提供选择测定指标的建议。
     
  • 为什么要用科铭试剂盒?

    生化测定的烦难主要在于下列几个方面:查阅文献选择测定方法,配制试剂,预实验以判断该方法是否适合自己的研究材料,反复调整以优化测定体系和测定步骤。对于研究经验和测定训练都不足的研究生而言,上述烦难常常会造成测定反复失败,导致时间、样品和试剂的大量浪费,不能及时获得可靠的数据。
     
    选用试剂盒,等于把上述烦难工作外包给专业公司。与其他公司相比,科铭生物通过实用的系列成套试剂盒、实在的全面服务和实惠的价格赢得用户的信赖和支持。因此,生化测定首选科铭试剂盒。
     
  • 科铭牌试剂盒实用性主要体现在哪些方面?

    用户选用试剂盒,主要是为了及时得到可靠的数据。因此,试剂盒实用性是用户选购试剂盒的第一考虑。从实用的角度来看,科铭牌试剂盒必须满足下述要求。
     
    (1)质量可靠。在研发过程中选择权威测定方法,反复优化测定体系、测定条件和操作步骤,并且进行多种生物样品的实际测定验证,以确保测定的专一性、灵敏度、重复性和回收率;在生产过程中实行严格的质量控制,主要试剂选择国外知名生产商,并且从固定供应商处购买,生产人员经过系统长期培训,并且建立了严格的质量追溯体系。科铭生物实行先用后付方法,即用户满意后才付款。万一出现质量问题,科铭生物及时免费提供新试剂盒。
     
    (2)操作简便快捷。首先,测定方法以分光光度法为主,并且可以用酶标仪测定,保证绝大多数用户都有相应的仪器和操作经验。其次,保证测定结果可靠的基础上科学简化操作步骤,例如,根据反应步骤配制工作液,显著减少了用户加液次数,尽量统一加试剂的体积,显著减少用户调移液器的次数等等。最后,操作说明简洁明确,用户一看就懂。
     
    (3)规格合理。试剂盒中通常由必须现用现配的试剂。如果保证过大,用户一天内不能用完,会造成试剂浪费。因此,常量法科铭牌试剂盒以50T/48S规格为主,绝大多数用户能够一天内用完。微量法大规格包装可以节省用户经费。因此,科铭牌试剂盒也有大包装试剂盒,其中需要现用现配的试剂,采用分装成几个试剂瓶的方法,方便用户分次使用。
     
    (4)系列成套,便于用户选择。科铭生物紧跟研究热点,针对某个研究主题,优选测定指标,全面满足用户进行该主题研究的需要。
     
  • 科铭生物有哪些实在的全面服务?

    科铭生物不仅研发、生产和销售实用的试剂盒,而且通过实在的全面服务。主要包括以下几个方面。
     
    (1)由资深研发人员提供购买建议、测定疑难解决和测定结果分析帮助等及时全面的服务。
     
    (2)提供来样检测服务。
     
    (3)根据用户需要,及时研发新试剂盒,以满足用户研究需求。
     
  • 科铭生物实惠的价格主要体现在哪些方面?

    虽然说一份价钱一份货,但是能否从用户角度着想,真正提供物美价廉的服务还是赢得用户信赖和支持的不二法门。科铭生物实惠的价格主要体现在下述方面。
     
    (1)科铭牌试剂盒在研发过程中,就力求在保证测定结果可靠的基础上尽最大可能降低成本,从而提供物美价廉的试剂盒。首先,同一指标的不同测定方法,其试剂成本相差很大。因此,科铭生物在优选测定方法时,就必须考虑试剂成本问题,在测定效果近似的情况下,尽量选择试剂成本低的测定方法。其次,测定体系的体积会极显著地影响试剂成本。因此,科铭生物提供1 mL和0.2 mL两种测定体系,尤其是0.2 mL测定体系,不仅能够降低试剂成本,而且可以与酶标仪通用。最后,从不同进货渠道采购试剂,其价格相差显著。因此,科铭生物建立了固定采购网络,以在保证试剂质量的前提下尽可能降低采购成本。科铭生物通过上述努力,科铭试剂盒价格普遍低于市场同类产品的价格,例如线粒体复合体系列价格仅为同规格市场同类产品的37%。
     
    (2)尽可能让利与用户,提供明确的折扣。包括按照单次购买金额大小提供不同折扣和预付款多少提供折扣。
     
    (3)通过购买建议和测定疑难指导,防止用户化冤枉钱。科铭生物深知用户满意才是赢得市场的关键。因此,一方面,科铭生物在用户购买时会根据用户研究目的和对象提出合理的购买建议,以免用户误购和多购;另一方面,万一存在试剂盒质量问题,科铭生物免费提供新的试剂盒,如果不是试剂盒质量问题,科铭生物也尽全力提供技术支持,解决测定中疑难问题,防止用户浪费样品和试剂。
     
  • 为什么试剂盒会显得比较贵?

    如果用户对拟检测指标很有经验,样品数量非常多,而且时间比较充裕,科铭生物建议用户还是自己购买试剂进行测定,这样花钱比较少。相反,如果用户缺乏经验和测定技巧,而且时间比较紧,科铭生物建议购买试剂盒进行测定,这样性价比要高得多。
     
    试剂盒显得比较贵的原因在于综合成本高,包括(1)研发成本,(2)生产成本,(3)包装和运输成本,(4)税收成本,(5)房租成本、(6)推广成本。其中,试剂成本仅仅是试剂盒成本的一部分,因此不能仅仅用试剂累加的成本来代表试剂盒成本。曾经有用户问,你们试剂盒为什么比生产试剂盒所需试剂费用高?打个比方大家就能明白。大家去吃披萨,是否能够质问“披萨为什么比面粉贵”。何况,选用试剂盒就是把测定工作中烦难部分外包给专业公司,享受了服务,当然要支付相应代价。如5中所述,科铭生物已经仅最大可能提供物美价廉的试剂盒了,希望用户理解。
  • 科铭牌试剂盒常用哪种测定仪器?

    为了满足绝大多数用户的需要,科铭牌试剂盒测定方法以分光光度法为主,其中常量法的反应体系为1 mL,而微量法的反应体系为0.2 mL。其中微量法也可以直接用酶标仪来测定。但是,同一指标的常量法与微量法试剂盒不可以通用,因为两者测定体系不同。
     
  • 科铭牌试剂盒包括哪些规格?

    科铭牌试剂盒规格以T/S来表示,其中T表示该试剂盒能够测定的次数,S表示该试剂盒能够测定的样品数。例如50T/24S,表示该试剂盒可以测定50次,但是能够测定的样品数为24个样品(不包括重复)。考虑到用户使用方便和降低价格,科铭牌试剂盒常量法的规格以50T为主,而微量法以100T为主。
  • 如何确定试剂盒购买数量?

    购买某种试剂盒的数量可以大体按照下述公式计算:X(盒)=处理数×重复次数÷单个试剂盒能够测定样品的次数。但是,因为测定中操作失误,或者对某些样品测定结果有怀疑,需要补测,所以实际购买时总是应该从宽计算,通常可以在计算值基础上加一个试剂盒,免得要重新购买试剂盒,耽误时间。
     
    另外,科铭生物不建议一次购买大量同种试剂盒,因为(1)万一试剂盒质量有问题,不至于造成太大损失;(2)防止储存过久造成试剂盒失效;(3)防止因为样品质量问题,造成测定结果不可靠,而浪费经费。用户可以根据自己2~3周能够完成的测定样品数来估算一次购买数量。请用户放心,通常下单一周左右,试剂盒就可以送到用户手里,不好耽误后续测定工作。当然,为了保证用户享受相应折扣,用户可以一次下单,科铭生物可以根据用户指定时间,分批发货。
     
  • 如何更多地享受折扣?

    (1)按照单次购买金额,享受相应折扣。
     
    (2)用户根据需要,打预付款。用户可以根据自己实验室一年内需要的试剂盒数量,一次性给科铭生物打预付款。打预付款有如下好处:在预付款范围内,每次购买不受购买金额限制,都享受相应折扣;不受此前打预付款时发票清单中试剂盒种类和数量的限制,可以任意购买试剂盒种类和数量;打预付款前科铭生物开具增票,一次报销,以后购买试剂盒都从预付款内扣除,不再需要多次报销;便于用户经费统筹,可以提前安排课题结余。
     
  • 如何做好购买前咨询?

    购买前咨询非常重要,可以防止用户误购、多购和漏购。用户可以直接联系科铭生物,咨询相关试剂盒情况。用户还可以登录科铭生物网站,点击“试剂盒”栏目,再点击相关系列中拟购买的试剂盒名称,查阅相关内容,包括测定意义、测定原理和自备仪器与用品,判断该试剂盒是否是自己需要的以及自己实验室是否满足相应的仪器和用品要求,以免误购,即买回去,但是限于自己实验室条件,没有办法测定;或者在左上角输入关键词,直接查阅需要的试剂盒,会直接显示该试剂盒简介。
    当然,通常用户对自己的研究材料要比科铭生物的客服更了解。建议用户在选择拟测定指标时,查阅相关文献,以明确这种材料是否有人测定过该指标,以防止这种材料不含有该指标,造成误购。对于基本代谢的相关指标,通常不需要进行上述查阅。
    多购是指用户一次购买数量超过需要,或者自己没法在短期内完成相关测定。对于前者,一方面请用户按照8中方法进行计算,并且留有一定数量,以便补测;或者直接咨询科铭生物客服。对于后者,主要是两个方面原因,一方面生化试剂盒不是在无菌条件下生产,并且试剂反复冻融也会影响试剂稳定性,因此不宜长期保存,通常建议尽快用完;另一方面,万一试剂盒有质量问题,一次购买多了,会造成很大损失。通常,从下单后24h内发货,国内最多一周时间就可以拿到。因此,如果同一种试剂盒需要得比较多,建议一次下单,分批发货,这样既可以防止浪费,又可以享受相应折扣。
    漏购主要是指所买试剂盒数量没有留有余地,不能测完全部样品,需要补购;或者只买了某一种试剂盒,没有购买紧密相关的试剂盒,导致无法得出明确结论。建议用户在下单前一定要与科铭生物客服联系,明确订购试剂盒种类和数量,以免漏购。
     
  • 为什么要做预测定?

    (1)虽然科铭试剂盒在研发时已经经过多种不同生物样品的实际测定验证,但是用户样品千差万别,科铭试剂盒在研发时不可能一一验证。
    (2)虽然科铭试剂盒从固定供应商采购著名生产厂家生产的试剂,但是不同批次试剂质量仍然可能存在差别。
    (3)虽然科铭试剂盒生产过程进行严格质量控制,但是由于试剂盒是人工生产的,不能完全排除生产质量存在问题。
    (4)虽然科铭试剂盒选择知名快递商运输,但是仍然无法绝对保证其运输质量。
    鉴于上述原因,为了保证测定成功,科铭生物强烈建议用户做预测定。先取2个预期差异较大的样品进行预测定:如果测定正常,那么就可以开始正式测定;相反,如果测定结果有疑问,那么立即咨询科铭生物专家,以免浪费珍贵的样品。预测定请严格按照试剂盒所附说明书进行,切勿擅自改动,以免不能反映真正情况,耽误测定。
     
  • 用户可以改动试剂盒中哪些部分?

    因为用户的样品情况千差万别,所以在预测定后,用户可以根据预测定结果进行适当调整。其中可以自行调整的部分包括(1)样品质量与提取液的体积比,(2)反应时间,(3)单位。
     
    吸光度变化偏大或者偏小。为了保证测定体系中各试剂终浓度不变,可以适当改变样品质量与提取液的体积比,而不是改变加入的样品提取液体积。通过改变样品质量与提取液的体积比,达到调整样品提取液中含有的拟检测物质的浓度或者酶活性的目的。吸光度变化偏小可以增加样品质量与提取液的体积比;相反,如果吸光度变化偏小偏大可以减少吸光度变化偏小。
     
    吸光度变化偏大或者偏小。还可以相应地适当缩短或者延长酶催化反应时间。当然,要注意吸光度变化呈线性,否则不符合朗伯比尔定律。
     
    数据一般应该保持于小数点前不超过三位,小数点后也应该不超过三位。如果单位偏大或者偏小,可以通过改变单位来调整数据大小。例如,浓度单位可以选择摩尔、毫摩尔、微摩尔或者纳摩尔,体积单位升可以改为升、毫升和微升,时间单位可以天、小时、分钟和秒等。要注意有效数字的概念,即最终表达的数据,其位数不能超过参与计算的所有数值中位数最小的那个数据。
     
  • 如何处理疑似质量问题?

    (1)科铭生物对终端用户实行先用后付办法。即先下单,科铭生物提供试剂盒;用户测定完成后对试剂盒质量和科铭生物服务满意,再付款。因此,用户不需要担心质量问题。
    (2)科铭生物只对试剂盒质量本身负责。科铭生物负责指导解决测定中遇到的问题。万一出现质量问题,科铭生物免费提供新试剂盒。
    (3)请用户严格按照试剂盒所附说明书,进行试剂保存和测定操作。尤其是温度、加样体积和加样顺序,切勿擅自改动,以保证试剂盒使用效果。
    (4)请用户收到试剂盒后,首先立即检查外包装的面单是否正确和外包装有无破裂。如果误寄或者外包装不完整,请立即联系科铭生物。至于外包装内冰袋已经融化,通常不影响试剂盒使用效果,用户可以先做预测定,以判断试剂盒是否存在问题。如果对预测定结果有疑问,请用户立即联系科铭生物。其次,按照试剂盒说明书中试剂栏目,核对试剂种类是否正确;如果缺漏请立即联系科铭生物。最后按照试剂盒说明书试剂栏目,分别在不同指定条件下保存不同试剂。
    (5)强烈要求用户先做预测定,以免上来就大批测定,导致样品浪费。有疑问请立即联系科铭生物客服。
    (6)为了真正找到问题所在,用户需要客观、全面和及时地与科铭生物沟通。因为用户购买试剂盒的目的是及时获得可靠的数据,如果用户不能坦诚交流,最终耽误的用户测定。
     
  • 测定值与文献中相差太大怎么办?

    (1)生化测定主要目的是比较处理内和处理间该指标的变化。同时,要测定绝对值,往往是很可能甚至不可能的。因此,追求的不是绝对值而是相对值。
    (2)用不同测定方法和不同测定条件下得到的测定值可能存在很大差异。因此,如果测定方法不同,同一样品的测定值通常是不可以直接比较的。这也是建议使用试剂盒测定的理由之一。因为不同作者用同一试剂盒测定的数据才是可以相互比较的。
    (3)同一种材料,不同处理、不同发育状态和不同器官其生化指标可能发生很大变化。因此,能够直接用来比较的文献资料本来就不多。
    (4)当然,话说回来,测定值如果与文献报道相差太大,首先应该检查单位是否一致,包括摩尔还是毫摩尔,是干重、鲜重还是蛋白质浓度,是分钟还是秒,等等。其次,检查计算是否有误?最后,如果相差不是数量级,通常是很正常的。
     
  • 本底吸光度偏高怎么办?

    (1)吸光度太高,一方面可能偏离朗伯比尔定律,吸光度变化不再呈线性关系;另一方面会导致吸光度变化不灵敏。因此,吸光度不宜太高。如果可以,尽量控制在1以下。
    (2)构成本底吸光度是样品提取液含有在该波长产生强烈光吸收的其它物质,或者在测定光吸收减少速率的反应中,人为添加的底物在该波长下造成的光吸收。
    (3)如果是前者造成的,那么可以通过用对照再次调零,把本底光吸收消除。
    (4)如果是后者,那么只能接受。或者联系科铭生物,看看能否减少底物浓度。不过,大家知道,对于酶来说,底物浓度通常要求≥10Km。
    至于吸光度超过分光光度计测量范围,通常是两种情况,紫外应该用石英比色皿,错用了玻璃比色皿;或者比色皿不透光一面对着光源。其它情况还包括比色皿太脏,或者提取液本身颜色太深等。
  • △A接近于零怎么办?

    △A接近于零(吸光度为±0.00x),表示在反应时间内我们希望的反应几乎没有发生。包括三种情况。
    (1)如果是测定酶活性,表明样品几乎没有酶活性;如果是测定某种物质,则表明该样品几乎不含有此种物质。
    (2)样品保存不当。这就需要用户自己仔细检查样品处理、采集和保存以及提取状况。
    (3)体系中还发生了别的反应,该反应的底物或者产物在该波长下也有光吸收,并且变化方向相反,几乎抵消了希望的酶反应,可以通过设置新的对照排除。
    (4)试剂盒出现了质量问题。可以换一种完全不同的样品来验证,比如去室外随机采取某种正常的叶片来测定。如果同样没有活性,那表明试剂盒出现质量问题的可能性很大。请用户立即联系科铭生物。
     
  • △A为负值(≤ -0.0x)怎么办?

    (1)可逆反应造成。可以通过适当缩短反应时间来防止逆反应的发生。
    (2)体系中发生了别的反应。该反应的底物或者产物在该波长下也有光吸收,并且变化方向相反,超过了希望发生的反应,同样可以通过设置新的对照排除。
    (3)反应体系中存在颗粒或者气泡。随着时间延长,颗粒沉淀或者气泡破裂,会导致吸光度显著下降,出现负值。主要注意观察,即可发现是否属于这种情况。颗粒通常来源于样品粗提液,可以提供再次离心,确保得到澄清的上清液;当然也可能来自试剂,测定前观察试剂中是否有沉淀,如果有,一方面待充分溶解后再用,另一方面待颗粒沉淀下来后小心吸取上清液。气泡通常来源于反应本身,可以通过降低反应速度(如减少样品质量提取液体积比)来防止气泡产生。
     
     
  • 不同样品间测定值差异不显著怎么办?

    (1)该指标在不同样品间确实无变化。
    (2)操作重复性不好,掩盖了组内和组间差异。后者可以看重复之间吸光度变化的重复性,如果重复之间吸光度变化相差很大,表明主要可能是操作不规范造成的,尤其是加液体积不准确和反应时间控制不准确。
     
  • 试剂冷藏后出现沉淀还能用吗?

    可以。浓度较高的试剂,在冷藏后出现测定,主要是因为低温导致溶解度下降造成的。只要取出后放到常温中,通过震荡重新融化,就能正常使用。
  • 试剂已经变色是否还能用?

     不能用。通常是由于光照造成的。请务必注意标明避光保存的试剂一定要避光保存。
  • 如何保证测定温度?

    为了保证测定的准确性,通常要求测定条件完全一致。对于操作而言,主要是测定温度加液体积、加液顺序和反应时间一致。保证测定温度一致的措施通常如下。
     
    (1)优先选用带温控装置的仪器,如高档分光光度计或者酶标仪,可以直接设定需要的温度。但是要注意预热。
    (2)打开房间的空调,根据天气情况设定制冷或者加温,并且待室温稳定后再开始测定。
    (3)提前一小时冰箱中取出试剂,放到室温中。还可以利用水浴锅保温反应体系中体积最大的试剂,通常是缓冲液。这样,即使不是指定测定温度,但是可以保证不同样品基本在几乎同样的温度下测定。注意,待保温的试剂应该先放到水浴锅中,然后加温到指定温度,这样可以保证试剂温度与水浴锅温度一致;或者待保温试剂要在已经达到指定温度的水浴锅中保温超过半小时以上。
    (4)如果当地温差变化大,一定要注意调整室温。